柠檬酸又名枸椽酸,它存在于天然果实中。我国在1968年获得了薯干原料深层发酵柠檬酸成功。薯干原料深层发酵生产柠檬酸,原料丰富矿工艺简单,发酵水平较高,在很多地方都有生产柠檬酸的工厂。柠檬酸为五色透明结晶体或白色粉末,有一种诱人的酸味,它是食品、化工、制药、纺织等工业的重要原料。
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①培菌:生产柠檬酸所用的菌种为黑曲霉。黑曲霉不但能利用淀粉,而且还对蛋白质、纤维素、果胶物质等均有一定分解能力,它的产酸能力也较高,在生产上比应用其它微生物有更多优点。培菌的过程也是用试管、三角瓶、种母罐等逐步扩大培养。培养究竟分几个阶段可由生产规模来决定。按照酒精生产中所介绍的方法,用米曲汁或麦芽汁,再在其中加2%的琼脂配成培养基,分盛于试管中,每管5~10毫升,经灭菌处理后,斜置使其成斜面。将在土壤中分离的或生产中留用的合格菌种,用无菌操作接入试管培养基中。在32~34摄氏度的温度下培养5~6天,待繁殖旺盛,检验合格后,用无菌水将孢子完全洗下,即为孢子悬浮液。
生产上所用的种母醪是在种母罐串培养的。培养基中的糊化醪与发酵所用的糊化醪相同。将浓度为12%~14%的红薯淀粉浆液,放在灭过菌的种母罐中,通入1千克/平方厘米的蒸汽蒸煮糊化15~20分钟,待冷至33摄氏度,接入合格的孢子悬浮液,保持32~34摄氏度的温度,通入无菌空气,并用搅拌机搅拌进行发酵。每12小时取样检查,经5-6天即可发酵完全。检验合格后,即可投入发酵罐中使用。
②糊化发酵:红薯干经粉碎过筛后,送入拌料桶,加水配成浓度为12%~14%的淀粉浆液,用输送泵打入发酵罐,通入1千克/平方厘米的蒸汽蒸煮糊化15~20分钟。将糊化醪冷至33摄氏度时,按接种量为5%~7%接入种母罐中培养好的种母醪,在32~34摄氏度温度下搅拌,通入无菌空气发酵,每隔一定时间取样检查,发酵过程中控制pH为2.5~3,经5~6天即可完成发酵。在柠檬酸发酵过程中,pH值的控制对产酸关系很大。因为用薯干粉发酵生产柠檬酸时,首先要利用黑曲霉的糖化霉将淀粉先转化成葡萄糖,然后由葡萄糖转变成柠檬酸。糖化的最适pH值约为2.5~3.0,生成柠檬酸的pH值在2.0~2.5,如果发酵初期产酸过猛,就会影响糖化不彻底,造成残糖量高,产酸量低;或发酵过程中始终处于高pH值状态,就会生成以草酸为主的杂酸。解决这一问题一般可采用二种方法:一是调节通气和搅拌的强度,如前期通风量低些对糖化有利,后期适当增加风量,能促进产酸。二是在pH值降至2.0左右;加入一定量的灭菌碳酸钙乳剂,使pH值回升至2.2左右时,有利于糖化作用,能继续积累柠檬酸。
③中和:发酵后的物料,生产上叫发酵醪。发酵醪出料后,真空抽滤即为含柠檬酸的发酵液。先将发酵液用泵打入中和桶,加热到60摄氏度左右,再加入碳、酸钙粉末或石灰乳。碳酸钙用量可按下式计算:
碳酸钙用量=柠檬酸总量*0.714
柠檬酸总量=发酵液体积*滴定酸度*氢氧化钠浓度*0.07
将中和后的料液加热煮沸,使其它有机酸的钙盐溶解,而柠檬酸钙不溶。在过滤桶中抽滤,滤液弄去。沉淀用90摄氏度以上的热水洗去糖分。检查的方法是用1%~2%的高锰酸钾溶液1滴加到加毫升洗涤水中,3分钟内不变色,说明糖分已洗净。
④酸解:将洗涤后的柠檬酸钙沉淀放入稀释桶中,加水打成浆状,用泵将浆液打入酸解桶,在搅拌下缓缓加入浓硫酸分解。酸解终点的控制方法是:取甲、乙两支试管,甲管中放入1毫升 15%~20%硫酸,乙管中放入1毫升15%~20%氯化钙溶液(其浓度必须和甲管中硫酸的浓度相同).各试管中分别加入1毫升过滤后的酸解液,在水浴上加热至沸,冷却后均不发生混浊,再分别加入95%的乙醇。加乙醇后,甲管略呈浑浊,表示已达酸解终点。如果加乙醇前,甲管就已浑浊,表示酸解液中硫酸量不足;加乙醇后,乙管浑浊,表示酸解液中硫酸过量。假使硫酸过量,在酸解液中可稍加一些柠檬酸溶液进行调节。在工厂实际操作中,硫酸的加入量一般为碳酸钙用量的92%~95%.加完硫酸后,把酸解液加热到80~85摄氏度,保持30分钟,即可使反应完全,又能促进硫酸钙结晶的形成,以利分离。根据硫酸钙在水中的溶解度与温度的关系,酸解液在80摄氏度左右进行热抽滤较为适宜。滤饼硫酸钙用热水洗涤后弃去,滤液和洗涤液合并在贮液桶中,即为稀柠檬酸溶液。稀柠檬酸溶液流经盛有脱色树脂或活性炭的脱色柱进行脱色后,再流经装有强酸性阳离子交换树脂(如732型离子交换树脂)的交换柱,以除去钙、铁等阳离子杂质。
⑤浓缩结晶:从离子交换柱流出的稀柠檬酸镕液,利用真空抽入真空浓缩锅,在真空度为600~700毫米汞柱,50~60摄氏度温度下蒸发浓缩,使柠檬酸溶液的比重由1.07左右提高到1.34~1.35.为保证产品质量,必须采用减压浓缩,因为在常压下浓缩,易引起分解而产生分解乌头酸,而且结晶色泽变深。浓缩后的柠檬酸溶液趁热出料,利用真空抽入高位槽,再由高位槽放入结晶锅中,缓慢搅拌,开夹套冷却水将溶液冷至30~35摄氏度,撒入少量晶种(如果此时已有结晶可不加晶种),据待温度继续下降到20摄氏度以下(夏天需用冷冻盐水降温)出料。在离心机下进行甩滤,滤液可进一步浓缩、结晶,也可送至稀释桶,作为硫酸酸解前柠檬酸钙打浆用水。滤液还可送至碳酸钙中和工序,使它转变成柠檬酸钙,以便回收其中的柠檬酸。滤饼(即柠檬酸结晶)用20摄氏度以下的冷水洗涤后,离心分去水分,再送烘房进行真空干燥(温度控制在35摄氏度以下),即得成品柠檬酸。
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